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病理论坛在线咨询GS环保组织制备试剂处理组织免疫组化染色对比实验结果
GS环保组织制备试剂处理组织
免疫组化染色对比实验结果
病理技术流程中对组织的制备通常使用成本较低的甲醛与二甲苯，病理工作者长期承受甲醛、二甲苯等有毒有害试剂的侵害。哈尔滨格林公司研发的GS环保组织制备试剂（包括固定、脱水、透明）该产品以无醛、无苯等环保性得到认可，近年来在全国许多二级、三级医院得到应用。在宁波病理中心的免疫组化染色技术流程中，该产品是否能满足病理诊断的需要，需要在我中心的免疫组化染色操作技术流程条件下对其可靠性进行验证。
一、实验方案设计
实验分两组，一组为实验组以哈尔滨格林公司GS系列环保组织制备试剂（包括固定、脱水、透明）进行组织取材后组织制备，一组为对照组以常规10%福尔马林和二甲苯进行取材后组织制备。取宁波病理中心常规取材后具有代表性的新鲜标本18个，每个标本分别取两块，分别采用实验组和对照组试剂，分别置于ThermoPT420和Leica Prorie脱水机进行固定、脱水、透明浸蜡。使用一致抗体检验试剂进行免疫组化染色。切片经由高级职称的病理医师分别对比观察，***终核定其病理诊断的可靠性和应用性。
二、实验过程
（一）试剂选定
1. 哈尔滨格林公司组织处理试剂
1.1 GSA-01（组织固定液）
1.2 GSA-02（组织脱水液I）
1.3 GSA-03（组织脱水液II）
1.4 GSA-04（组织透明液）
2. 常规组织处理试剂
2.1 10%福尔马林
2.2 75%酒精
2.3 95%酒精
2.4 无水酒精
2.5 二甲苯
3. 抗体
3.1 ER
3.2 PR
3.3 HER-2
3.4 CK8
3.5 CK19
3.6 CK20
3.7 TTF-1
3.8 CD3
3.9 CD20
3.10 Ki-67
（二）标本选定
宁波市临床病理诊断中心手术标本（常规取材后），每个标本取1-1.5cm×0.5-1cm×0.3cm大小2块，分别用于实验组和对照组。
组织类型包括：
1. 子宫内膜与肌层×3
2. 肺组织×3
3. 扁桃体×3
4. 乳腺导管内原位癌×1
5. 乳腺纤维腺瘤×2
6. 甲状腺×3
7. 胃癌×1
8. 胃壁组织×2
9. 结肠×3
10. 肝组织×3
（三）实验方法
1. 实验组用ThermoPT420脱水机进行脱水机内固定、脱水，透明及浸蜡，具体程序：
GSA-01 2h
75%酒精 30min
75%酒精 30min
80%酒精 1h
GSA-02 40min
GSA-02 1h
GSA-03 40min
GSA-03 1h
GSA-04 1h
GSA-04 1.5h
石蜡 1h
石蜡 1h
石蜡 1h
石蜡 1h
2. 对照组用LeicaPlorie脱水机进行脱水机内固定、脱水、透明及浸蜡，具体程序：
10%福尔马林 2h
75%酒精 30min
75%酒精 30min
85%酒精 1h
95%酒精 40min
95%酒精 1h
无水酒精 40min
无水酒精 1h
二甲苯 1h
二甲苯 1h
石蜡 1h
石蜡 1h
石蜡 2h
3. 免疫组化染色程序：
对照组及实验组ER、PR、HER-2、CK20、CD3、CD20、Ki-67的切片均按Roch VENTANA免疫组化仪标准优化程序进行染色并封片。
对照组及实验组CK8、CK19的切片均按DOKO免疫组化仪标准优化程序进行染色并封片。
4. 切片判读
由3名具有高级职称的病理医师分别对比观察切片，并记录。
（四）实验对比结果
经显微镜下对比实验组与对照组发现：1）两组均背景干净，阳性部位准确；2）乳腺组织及子宫内膜ER、PR 、Ki-67检测中，实验组细胞核表达呈棕色，对照组阳性细胞核呈棕黑色，但阳性表达的范围与阳性率一致；3）其余各项指标，两组间表达范围及染色程度均一致。
三、实验对比结论
实验组与对照组在常用免疫组化染色对比研究中一致性高，无显著性差异，均达到诊断要求。表明经哈尔滨格林公司组织处理试剂固定脱水透明的标本与常规试剂固定脱水透明的标本在免疫组化染色中能满足病理诊断的需要。
2014.10.6
下载地址：/uploadfile/file/20170810/20170810135414_43972.docx