GS环保组织制备试剂处理组织HER-2荧光原位杂交检测（FISH）对比实验结果

GS环保组织制备试剂处理组织

HER-2荧光原位杂交检测（FISH）对比实验结果

病理技术流程中对组织的制备通常使用成本较低的甲醛与二甲苯，使得病理工作者长期承受甲醛、二甲苯等有毒有害试剂的侵害。哈尔滨格林公司研发的GS环保组织制备试剂（包括固定、脱水、透明）该产品以无醛、无苯等环保性得到认可，近年来在全国许多二级、三级医院得到应用。在宁波病理中心的免疫组化染色技术流程中，该产品是否能满足病理诊断的需要，需要在我中心的免疫组化染色操作技术流程条件下对其可靠性进行验证。

一、实验方案设计

实验分两组，一组为实验组以哈尔滨格林公司GS系列环保组织制备试剂（包括固定、脱水、透明）进行组织取材后组织制备，一组为对照组以常规10%福尔马林和二甲苯进行取材后组织制备。取宁波病理中心常规取材后乳腺标本3个，每个标本分别取两块，分别采用实验组和对照组试剂，分别置于ThermoPT420和Leica Prorie脱水机进行固定、脱水、透明浸蜡。使用HER-2荧光原位杂交检验试剂进行FISH检测。切片经1名负责分子病理检测的高级职称的病理医师及1名高级职称技师进行对比观察，***终核定其病理诊断的可靠性和应用性。

二、实验过程

（一）试剂选定

  1. 哈尔滨格林公司组织处理试剂

   1.1  GSA-01（组织固定液）

   1.2  GSA-02（组织脱水液I）

   1.3  GSA-03（组织脱水液II）

   1.4  GSA-04（组织透明液）

  2. 常规组织处理试剂

  2.1  10%中******尔马林

  2.2  75%酒精

  2.3  95%酒精

  2.4  无水酒精

  2.5  二甲苯

 3. 探针

HER-2探针为雅培生物科技公司产品。

（二）标本选定

宁波市临床病理诊断中心手术标本（常规取材后），每个标本取1-1.5cm×0.5-1cm×0.3cm大小2块，分别用于实验组和对照组。

组织类型包括：乳腺导管内癌及浸润性癌×3

（三）实验方法

  1. 实验组用ThermoPT420脱水机进行脱水机内固定、脱水，透明及浸蜡，具体程序：

GSA-01   2h

75%酒精 30min

75%酒精 30min

80%酒精  1h

GSA-02   40min

GSA-02   1h

GSA-03   40min

GSA-03   1h

GSA-04   1h

GSA-04   1.5h

石蜡    1h

石蜡    1h

石蜡    1h

石蜡    1h

  2. 对照组用LeicaPlorie脱水机进行脱水机内固定、脱水、透明及浸蜡，具体程序：

10%中******尔马林   2h

75%酒精  30min

75%酒精  30min

85%酒精  1h

95%酒精  40min

95%酒精  1h

无水酒精  40min

无水酒精  1h

二甲苯    1h

二甲苯    1h

石蜡      1h

石蜡      1h

石蜡      2h

 3. 荧光原位杂交检测程序：

对照组及实验组的切片均按雅培生物科技公司标准优化荧光原位杂交程序进行制片。

 4. 切片判读

由负责分子病理检测的高级职称的病理医师及技术员对比观察切片，并记录。

（四）实验对比结果

经荧光显微镜下对比实验组与对照组发现：1）两组均背景干净，非特异性荧光背景不明显； 2）两组的HER-2红色荧光信号及CEN-17绿色荧光信号均清晰，细胞核DAPI蓝色荧光清晰并结构良好；3）两组的HER-2扩增范围信号统计后结果一致。

三、实验对比结论

实验组与对照组在常用免疫组化染色对比研究中一致性高，无显著性差异，均达到诊断要求。表明经哈尔滨格林公司组织处理试剂固定脱水透明的标本与常规试剂固定脱水透明的标本在HER-2荧光原位杂交检测中表达能满足HER-2 FISH检测的需要。

                                                                                                                                2014.10.6

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添加时间：2016-04-15 点击量：1559