GS无醛固定液在病理技术中的应用价值

GS无醛固定液在病理技术中的应用价值

聂贵军　　

吉林省敦化市中医院病理科

　　摘自：2014年第6期《医药前沿》

组织固定是病理技术工作的关键步骤，直接决定分子病理检测和常规染色效果项目的实验结果。以前我们的病理科普遍都一直使用4%中性甲醛作为常规组织固定液，然而，我们都知道甲醛是一种具有强烈刺激性的挥发性液体，不仅污染环境，而且对我们人体的健康存在着很大的危害。因此我们也一直探寻者能够找到一种固定液能够替代甲醛固定液，并且在病理技术上比甲醛固定液的效果更好。哈尔滨格林标本技术开发有限公司研制出一种GS无醛固定液。该种无醛固定液是一种新型的组织固定液，因其不含甲醛，对人体无伤害、环境无污染，是病理技术工作中理想的固定液。本文就GS无醛固定液对不同组织的固定效果进行分析，以验证其取代甲醛的可行性。
1. 资料和方法
 1.1一般资料 

随机选取我院肿瘤手术室送检的新鲜标本6例，其中包括1例结肠癌患者，2例乳腺癌患者，2例淋巴瘤患者以及1例肝癌患者。我院使用的是由哈尔滨格林标本技术开发有限公司研发的GS无醛固定液。抗体包括:PR、ER及 HER2(Roche公司)，CK18、CD20、CDX2、LCA、CD79a及由福州迈新生物技术开发有限公司提供的bcl-2，HER2探针和Vvsis原位杂交试剂盒。
 1.2 方法
　　1.2.1 检测方法分别切取肿瘤组织及瘤旁正常组织各2份，将其切成2cm×1cm×0.32cm大小的组织块，放入包埋盒中，分别用无醛固定液（实验组）和4%中性甲醛固定液（对照组）固定50d，后进行常规脱水、透明、浸蜡和包埋，其中环保型无醛固定液固定的组织用生物组织标本制备套液中的生物组织标本制备脱水液、生物组织标本制备无苯透明液、生物组织标本制备脱水液进行脱水和透明。待所有标本制备完成之后，统一切片进行免疫组化染色，两组均0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液抗原修复5min。　

1.2.2 免疫组化检测 乳腺浸润性都导管癌进行PR和ER检测；结肠腺癌进行CK20和CEA检测；肝腺癌进行Her-2和CK8/18 检测；淋巴瘤癌进行CK5/6检测；正常淋巴结进行LCA和CD20检测。反应结果判断标准参照许良中等建议，采取单盲法由2位初级病理医师初步比较，***后由2位高级职称病理医师审核，

 1.3 统计方法 

将笔者在实验过程中获得的数据输入spss16.0统计学软件中进行处理。其中计数资料采用卡方检验。若检验结果p<0.05，说明两种不同的病例技术之间差异具有统计学意义。

2. 结果
　　在实验过程中发现，无醛固定液固定的6例标本，在切片中感觉切片厚薄均匀，组织块软硬适中，连续性比有醛固定液好。常规HE染色效果良好，细胞核浆相对于甲醛固定液其形态清晰完整，对比明显。结肠癌病例(CK18、CDX2和LCA)、乳腺癌病例(ER、PR和HER2)、淋巴瘤病例以及肝癌病例行免疫组化染色。染色结果显示无醛固定液固定的标本组织细胞要比有醛组织液固定的标本组织抗原性保存要好，阳性结果定位准确，背景较为清晰。淋巴瘤病例均行FISH检测HER2基因扩增状态，检测结果显示细胞核结构完整排列紧密，红色和绿色荧光信号较好。
　　表1  比较两组标本中经1、5、10、15、20 d 染色较好的结果比较（例，%）分组 n 1～20d 20～50d >50   
　　无醛固定液固定法 6 3 6 6
　　有醛固定液固定法 6 3 4 5
　　P值 - >0.05 <0.05 <0.05
3. 讨论
　　随着医学技术的飞速发展，学科之间相互渗透和影响，很多新的病理仪器和技术不断涌现，我国病理技术有着明显的变化，大量新方法、新技术、新仪器的应用极大提高了病理技术水平，使我们对病理的认识更加透彻。
　　根据不同固定液会对组织的穿透能力不同，会使细胞内的低分子质量物质、蛋白质、脂类、黏多糖和核酸物质的丢失，而良好的固定液可以避免这一情况的出现增大伸缩性和弹性度、使组织细胞的抗原性得到有例的保存。在过去一段时间甲醛一直是用于固定组织的标准固定液。甲醛固定液具有能长期保存组织，价格低廉，能进行各种特殊染色，保存的组织形态良好，进行抗原修复后的免疫组化染色结果可靠等优点临床上多用于其进行固定。但随着医学的进步和科学的发展我们发现了甲醛固定液也有缺点，包括会形成甲醛色素，与含铁血黄素相混淆，存放过久可聚合形成三聚甲醛，会对固定的效果产生一定的影响；且免疫组化结果会因为长时间的固定而受到影响。长期接触甲醛会引发慢性呼吸道疾病、过敏、甚至肿瘤的发生。在我国，无醛固定液尚未得到广泛应用，但在国外发达国家，已经推广应用环保型的固定液取代甲醛固定液。

目前甲醛固定法在绝大部分病理科仍然应用作为日常工作中的固定方法。但在保持组织形态学、保存抗原性及DNA/RNA等方面的性能经研究显示环保型无醛固定液不逊色于甲醛固定液，甚至在很多的医疗方面还要更优于甲醛固定液。本研究结果显示，固定时间在1～20d时，无醛固定液的免疫组化染色结果和有醛固定液的免疫组化染色结果差异无统计学意义（>0.05），但经过50d的固定时间后，甲醛固定液组的免疫组化阳性结果明显劣于环保型无醛固定液。另外经我们研究发现无醛组固定1d的免疫组化结果与固定50d的免疫组化结果进行比较，发现两组差异无统计学意义，说明用环保型无醛固定液长时间固定组织至50d或者更多时间，免疫组化染色结果不会受到任何影响或者影响甚微。而在甲醛组固定20d时，免疫组化结果与固定1d差异有统计学意义（<0.05)，说明甲醛固定液不适宜长时间固定组织，否则会导致抗原丢失，使免疫组化染色结果受到一定程度的影响。
　　GS无醛固定液是一种与甲醛固定组织的时间相同而且无色、******、无异味、无刺激性的环保固定液。我们的研究结果显示，GS无醛固定液病理科日常工作中与常规4%中性甲醛固定液在免疫组化染色、HE染色、荧光原位杂交等均有相同的效果，完全可以取代甲醛成为病理科常规固定液。

参考文献
[1] 潘黎明.环保型无醛固定液与甲醛固定液对免疫组化染色的效果比较[J].现代实用医学，2013，25(5):583-584.
[2] 许良中，杨文涛.免疫组织化学反应结果的判断标[J].中国癌症杂志，1996，6(4):229-231.
[3] 周会芹，杨江挥，余琦，等.不同组织固定液对免疫组化结果的影响[J]. 诊断病理学杂志，2009，6(16):478.

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