GS液在胸腹水沉渣切片中的应用

GS液在胸腹水沉渣切片中的应用

孙廷谊  李真  谢红建  孔令非

河南省人民医院病理科

摘自：2014年第07期《诊断病理学杂志》

胸腹水的细胞学检查对疾病的临床******有重要的指导作用。常规检查方法是将胸腹水进行离心后涂片再染色镜检，由于该方法存在涂片后细胞重叠、结构不太清晰、阳性检出率不高等缺点，因而现在常使用胸腹水沉渣石蜡包埋切片方法来提高胸腹水细胞学的阳性率。沉渣包埋常用甲醛做固定液，而甲醛为有毒、有害试剂，所以我们改用GS环保试剂来固定胸腹水沉渣，取得了较为理想的效果。

 1. 材料与方法

  1.1 材料

收集河南省人民医院病理科2011~07—2013-12 间送检的胸腹水标本共196例，其中胸水136例，腹水 60例。

主要仪器和试剂：Leica染色封片一体机，Leica~Band- Max全自动免疫组化染色仪，GS系列环保试剂（哈尔滨格林标本技术开发有限公司）。免疫组化试剂AE1/AE3、CEA MC、vimentin和MaxVision~2及试剂盒均购于福州迈新生物技术开发有限公司。

  1.2 方法

   1.2.1标本处理

选取新鲜的胸腹水，每例标本分成2组，混匀后每份抽取胸腹水约50 ml置于2个离心管中，2000 r/ min离心10 min，弃上清；在试管底部沉淀物中加入50%乙醇，边加边摇，使离心管底部沉淀物分散、溶解直至色变浅红，这时再次2000 r/min离心5 min，去除上清液，一组加入4%中性甲醛固定，离心后静置3 ~6h，弃甲醛液，将沉淀物 放入组织脱水盒后进行常规脱水、透明、浸蜡、包埋制成蜡 块，此为常规组。另一组加入GS无醛固定液进行固定，离心后静置3 ~6 h，弃固定液，将沉淀物放入组织脱水盒后进行GS系列处理制成蜡块，称为GS组。

   1.2.2实验方法

将常规组和GS组的蜡块统一切片，切片厚3 pm， HE染色用普通载玻片制片，烤片3 min;免疫组化染色切片用防脱载玻片制片，65T：烤片60 min。每个蜡块均标记AE1/AE3、CEA、MC和vimentin共4种抗体。为了使免疫组化染色更具有可比性，同一病例的2组蜡块放在一批，选用相同的染色条件，在同一台染色机上进行染色。用已知阳性切片作为阳性对照，用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。HE染色按常规进行染色，免疫组化按试剂盒说明书进行，分别用手工和全自动染色机操作。染色结果由2位资深病理医师进行判读。

 2. 结果

  2.1 HE染色

2组切片染色后薄厚比较均匀，着色效果良好，细胞形态比较完整，组织结构显示也较清晰，色彩比较鲜艳，核浆对比也比较分明，染色结果比较二者并无显著差异。

  2.2免疫组化染色

2组切片经手工和全自动染色机两种 方式染色后，均未发现脱片现象，细胞形态结构完整，阳性定 位准确，背景比较清晰，非特异性着色少，阳性对照和阴性对 照表达均正常，两种免疫组化染色的结果未见明显差异。

 3. 讨论

胸腹水沉渣石蜡包埋切片的优点是能收集到较多的有核细胞，使得切片上的细胞相对比较集中，而且细胞结构也比较清晰，大大提高了胸腹水细胞的阳性检出率。胸腹水沉渣石蜡包埋的蜡块可以和组织一样反复连续切片，避免了单一涂片取材的局限性，可以运用多种抗体进行免疫组化标记，以满足诊断的需要，而且染色时不容易出现掉片现象，阳性定位准确可靠，非特异性着色少，背景清晰，增加了脱落细胞的诊断价值。

GS环保试剂不含二甲苯、甲醛等有毒、有害物质，具有较强的固定、脱水及脱脂作用，不但对组织渗透性强，缩短了脱水时间，而且还能保持良好的组织形态学结构，不会出现细胞空泡和核固缩现象，同时还能保护完整的细胞膜，能充分保护组织中的核酸和抗原不被降解、扩散或破坏，对RNA和DNA保存较理想，也有利于显示出细胞的亚结构。本实验显示，用GS环保试剂固定处理胸腹水沉渣，石蜡包埋切片的HE染色和免疫组化染色均取得了理想的效果，完全可以替代甲醛应用于细胞学的检查。

参考文献

[1] 付海洋，王成勤，赵洁，等.快速石蜡法在胸腹水细胞蜡块制作中应用[J].临床与实验病理学杂志，2012， 28 (7) :820 -821.

[2] 田玉旺，朱红艳，李琳，等.GS环保试剂在病理制片技术中的应用[J].诊断病理学杂志，011，18(4):312-313.

[3] 董建强，王德田.格林标本——新一代环保型病理组织标本固定脱水透明试剂试用报告[C].2011年全国病理技术新进展研讨会论文汇编