对照检测GS试剂对组织抗原的影响

对照检测GS试剂对组织抗原的影响

孙廷谊  李真  谢红建  孔令非

河南省人民医院病理科

摘自：2014年05期《诊断病理学杂志》

目前，经过GS试剂处理制作的蜡块在放置较长时间后 对组织抗原的保存效果的报道却较少。因此，我们通过免疫组化染色和分子学检测，对60例标本组织中21种抗体进行了回顾性检测，测试经GS试剂处理制作的蜡块经过2年放置后组织抗原的保存情况。

1.材料与方法

 1.1材料

选取河南省人民医院病理科2011-J7—12间手术切除标本60例，其中乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、宫颈癌、间质瘤、胃癌、前列腺、脑组织、淋巴瘤、扁桃体各6例，所有肿瘤均经病理证实，患者术前未进行化、放疗。将每例标本的同一部位先切取一块较大组织，再将这一块较大组织块从中间切开，一块制作为常规蜡块组，另一块制作为GS蜡块组。 两组共120个蜡块在本次实验之前均经过2年的放置。

免疫组化抗体 ER、PR、HER4、Ki~67、AE1/AE3、CD117、 DOG4、GFAP、p53、NF 为 Dako 公司产品，CA125、CA19~9、 p16、actin、p63、PSA、CD34、LCA、CD3、CD20、CD10 和 MaxVision~2试剂盒均购置自福州迈新生物技术开发有限公司。GS环保试剂全部购于哈尔滨格林标本技术开发有限公司。HER-基因扩增检测试剂盒购自于北京市金菩嘉医疗科技公司。

 1.2 方法

  1.2.1 相互对照

所有蜡块进行切片时，把原来取材时同部位一分为二的两块组织重新黏贴在同一张载玻片上，每张玻片近标签端黏贴常规蜡块组的切片，远标签端黏贴GS蜡块组的切片，两个组织片的间距>0. 3 cm，这样使原来同一部位被2个组的组织切片在同一载玻片上相互对照。再将传统HE染色和GS染液HE染色设为对照组，将免疫组化手工染色和全自动染色也设为对照组。所有切片厚3 μm， HE染色切片用普通载玻片制片，免疫组化染色的切片用防脱载玻片制片。

  1.2.2  实验对照

乳腺癌组织检ER、PR和c-ab~B2；胃 癌检测AE1/AE3和actin；前列腺检测p63和PSA；脑组织检测GFAP和NF；扁桃体检测CD3和CD10；结肠癌组织检测 CA19~9和p53；卵巢癌组织检测CA125和CD34；宫颈癌组织检测p16和Ki-67；间质瘤组织检测CD117和DOG - 1；淋巴瘤组织检测CD20和LCA。21种抗体均另设阴性和阳性对照，用已知阳性的切片作为阳性对照，用PBS缓冲液代替一 抗作为阴性对照。

FISH检测则选择6例乳腺癌中2例HER4染色为3 + 的标本进行检测，同样每张载玻片上也黏贴常规蜡块组和 GS蜡块组两种HER~2染色为3 +的切片。操作步骤严格依据说明书进行。

 1.3结果

判定所有染色均经2位资深病理医师采用双盲法判读。浸润性乳腺癌细胞核内橘红色HER4基因的荧光 信号与17号染色体的绿色荧光信号的比值>2.2时为 HER4基因扩增，<1.8为无扩增，1.8 ~2.2需要再计数30个细胞核中的信号情况。

 

2. 结果

 2.1 HE

同一载玻片上2种切片相比无明显差异，传统和GS染液染色结果也无明显差异，染色后细胞形态比较完整，组织结构显示得比较清晰，色彩较鲜艳，核浆对比比较分明，染色效果均显示良好。

 2.2免疫组化

同一载玻片上2种切片染色结果无明显差 异。手工与全自动染色切片结果也无明显差异。免疫组化染色后组织结构较完整、无脱片、着色均匀，阳性定位准确、 无非特异性着色、背景较清晰、容易判读。阴性对照切片无着色，细胞核蓝染，背景也清晰。

 2.3 FISH

2例浸润性乳腺癌HER2 (3+)的标本均能看到呈簇状分布的红色信号，细胞核结构完整，红色和绿色的荧光信号较好，对比清晰。

3. 讨论

GS试剂对组织的渗透性较强，可以使脱水时间缩短，具有较强的固定、脱水、脱脂作用，处理后组织的软硬度较适 中，不容易使组织收缩过度，也不容易出现细胞空泡现象与核固缩现象，可以使组织形态学结构保持良好，细胞膜的完 整性也得到相应保护，保护了组织中的核酸和抗原，所以对组织中的DNA和RNA保存效果较好。

本次实验在同一载玻片上均黏附原来同一部位同一组织被切开分别处理的常规蜡块组和GS蜡块组的组织切片 作为相互对照进行染色，充分保证了两组的组织切片是在同一环境条件下进行的各种染色，使得结果更加真实、可靠。 结果显示，经GS试剂处理后制作的蜡块经过较长时间（>2 年）放置后组织抗原依然保存较好。
下载地址：/uploadfile/file/20170811/20170811171735_37452.docx

添加时间：2016-04-13 点击量：1442