登陆会员
注册会员
下载中心
病理论坛在线咨询回顾性测试GS试剂处理的蜡块组织抗原的保存效果
回顾性测试GS试剂处理的蜡块组织抗原的保存效果
孙廷谊 谢红建 孔令非
河南省人民医院病理科
摘自：2013年05期《诊断病理学杂志》
GS系列环保型病理试剂是一套国内研制的甲醛和二甲苯替代试剂，它可以替代传统的以甲醛二甲苯为主体的石蜡切片技术流程，减少室内有毒有害气体的污染和毒害作用，同时杜绝大量排放此类毒害化学物质对生活环境的污染，随着GS试剂使用的推广，GS试剂处理制作的蜡块放置后组织抗原的保存状况也应该引起大家的重视。
1.材料与方法
1.1 材料
选取河南省人民医院病理科2011-7月一 12 月，手术切除标本80例，其中乳腺癌20例，胃癌20例，前列腺、脑组织、淋巴瘤、扁桃体组织各10例，乳腺癌、胃癌均经 病理证实，患者术前未进行放疗或化疗。取材时相同部位取2份。常规蜡块组:1份常规固定、脱水透明制作蜡块；GS蜡 块组:1份经GS无醛固定液固定、GS系列脱水透明套液试剂制作蜡块，2组蜡块均经过1年以上时间的放置。
主要仪器和试剂Leica染-封一体机，Leica~Band全自 动免疫组化染色仪，Leica 机用 Bond Polymer Refine Detection 染色试剂盒。免疫组化抗体ER、PR、Ki~67、AE1/AE3、 GFAP、NF 为 DAKO 公司产品，actin、P63、PSA、CD34、LCA、 CD3、CD20、CD10、vimentin (MAB—)178)和 Maxvision 试剂盒均购置于福州迈新生物技术公司。GS系列试剂购置于哈尔滨格林标本技术开发有限公司。
1.2方法
1.2.1实验 对照常规蜡块组和GS蜡块组所有蜡块统一进行切片，每个蜡块连续切片用防脱载玻片制片厚3|xm，65T：烤片 60min。乳腺癌检测 ER、PR、Ki~67 和 vimentin，胃癌检测AE1/AE3、actin和vimentin，前列腺检测p63、PSA和 vimentin，脑组织检测GFAP、NF和vimentin，淋巴瘤检测 CD34、LCA 和 vimentin，扁桃体检测 CD3、CD20、CD10 和 vimentin，用已知阳性切片作阳性对照，用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。
1.2.2传统HE染色 略。
1.2.3 GS环保型染液HE染色 GS套染试剂染色，无苯封片胶封片。
1.2.4 免疫组化手工染色 每种抗体采用相应抗原修复方法，一抗室温醇育1h，Maxvision二抗室温醇育15min，DAB 显色，复染、脱水、透明，中性树胶封片。
1.2.5全自动免疫组化染色 严格按Leica~Band全自动免疫组化染色仪SOP文件操作。
2. 结果
2.1 HE染色
GS蜡块组与常规蜡块组HE染色效果良好，细胞形态完整，组织结构显示清晰，色彩鲜艳，核质对比分明，染色结果相2组无明显差异。
2.2 免疫组化染色
GS蜡块组与常规蜡块组两组切片经手工染色与全自动染色后切片组织结构完整、无脱片现象、着色均匀、阳性结果定位准确、无非特异性着色、背景清晰、 易判断，两组免疫组化染色结果未见明显差异。阴性对照切片无DAB着色，细胞核蓝染，背景清晰。每个蜡块均做检测的vimentin胞质着色，定位准确，背景清晰，两组免疫组化染色结果也未见明显差异。
3. 讨论
GS试剂不含甲醛、二甲苯等有毒有害物质，运用界面化学及电荷占位原理，对组织标本进行脱水、透明和浸蜡，而且有较强的固定、脱水、脱脂兼硬化作用，不易导致组织过度收 缩，无细胞空泡与核固缩现象产生，处理的组织软硬适中，尤 其对脂肪、淋巴组织等的处理效果较好，处理较坚韧的子宫肌瘤、皮肤组织也能使其具有较好的柔韧度而有利于切片。GS试剂对组织渗透性强，能缩短脱水时间，能保持良好的组 织形态学结构，同时能保护细胞膜的完整性，能保护组织中的抗原和核酸不被破坏、降解或扩散，对DNA和 RNA保存较佳，也有利于显示细胞的亚结构。以vimentin 作为对照，是为了观察组织经甲醛固定后预期抗原表达的敏感性，按固定后抗原损伤的程度来进行分析。vimentin几乎 在任何组织中都有表达，在与上皮组织相连接的间质中存在着大量的血管vimentin可阳性表达，如果在同一张切片的间 质中出现vimentin染色微弱或部分区域变弱的情况，表明是不当的处理导致抗原破坏。本实验vimentin胞质着色，定位 准确、背景清晰，结果可靠，证明标本组织的细胞抗原性保存良好。GS蜡块组与常规蜡块组切片经免疫组化后组织结构完整，无脱片现象，着色均匀，阳性结果定位准确，无非特异性着色，两组免疫组化染色结果未见明显差异。我们体会到 用GS无醛固定液固定、GS系列脱水透明套液试剂制作的组织蜡块，在经过相对较长一段时间放置后切片所做的手工和 全自动免疫组化染色均能取得满意的结果。
参考文献：
[1]田玉旺，朱红艳，李琳，等.GS环保试剂在病理制片中技术 工作中的应用.2011年全国病理技术新进展研讨会论文汇 编，20113.25 -28.
下载地址：