GS试剂在病理自动化染色中的应用

GS试剂在病理自动化染色中的应用

 

孙廷谊   谢红建   孔令非  河南省人民医院病理科

 

病理技术是病理诊断的基础，常规病理是病理技术***重要的部分，它包括固定、脱水、切片、染色等几个主要步骤，常用的固定剂为4%甲醛（10%福尔马林），脱水透明的主要试剂为酒精和二甲苯。甲醛和二甲苯具有强烈的刺激性和挥发性，不仅污染环境，而且严重危害身体健康。因此，寻找一种对人体******无害且安全的甲醛和二甲苯替代品，已成为病理技术工作者的一种迫切愿望。本文将GS试剂制备的切片应用于病理自动化染色，取得了满意效果。

1  材料与方法

    1.1 材料  随机选择河南省人民医院手术室送检的新鲜标本49例，包括乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、宫颈癌、间质瘤、淋巴瘤、扁桃体各7例。

    1.1.1 取材  取材时先取好一块较大组织，然后把这一块较大组织从中间横切纵切各一刀分成4块（每个组织块不小于10 mm X 10 mm X 3 mm），以共同的的刀切面向下装入组织脱水盒，固定时间24小时。

    1.1.2 实验对照  49例标本共取196块，同一标本的4块组织分成A、B、C、D共4个组（每组49块）：

    ①A组：用10%中******尔马林固定、传统方法脱水透明包埋。②B组：用GS无醛固定液固定、传统方法脱水透明包埋。③C组：用10%中******尔马林固定、GS系列脱水透明套液脱水透明包埋。④D组：用GS无醛固定液固定、GS系列脱水透明套液脱水透明包埋。

    1.1.3包埋  常规包埋蜡块时，以共同的刀切面向下装入组织包埋盒以便切片时组织结构相近。

    1.1.4主要仪器和试剂  脱水机（Leica ASP 300型），Leica染-封一体机，Leica-Band全自动免疫组化染色仪。GS系列试剂（哈尔滨格林标本技术开发有限公司）。免疫组化试剂一抗均为工作液（福州迈新生物技术公司），Leica机用染色试剂盒，HER-2基因扩增检测试剂盒购自北京金菩嘉医疗科技有限公司。

1.2方法

    1.2.1 HE染色  将4个组蜡块统一切片（厚3μm）后常规烤片，将GS染色系列套装试剂放入Leica染-封一体机同时进行全自动HE染色。

    1.2.2 IHC染色  为了使IHC染色具有可比性，必须尽量减少外在因素的干扰，便于染色后对切片进行观察分析，所以同种病例的每一标本的A、B、C、D 4个组要各取一个相对应的蜡块放在一批统一进行切片，厚3μm，65℃烤片15min，同种抗体每批染色共28张，选用相同的染色条件，在同一台Leica-Band全自动免疫组化染色机上染色。乳腺癌组织检测ER、 PR、C-erb-B2；结肠癌组织检测CA19-9、 p53；卵巢癌组织检测CA125、CD34；宫颈癌组织检测P16、Ki67；间质瘤组织检测CD117、DOG-1；淋巴瘤组织检测CD3、CD20；扁桃体组织检测Bcl-2、Pax-5。

    1.2.3 FISH检测  选择7例乳腺癌中2例C-erb-B2+++阳性的标本做FISH检测。操作步骤严格按照说明书进行。结果判断：浸润性乳腺癌细胞核内橘红色HER-2基因荧光信号与17号染色体绿色荧光信号比值＞2.2时为HER-2基因扩增，＜1.8为无扩增，若比值在1.8～2.2之间，则需要再计数30个细胞核中的信号。

2 结果

    2.1 HE染色  A、B、C、D 4个组常规HE染色效果良好，细胞形态完整，核浆对比清晰。其中A、B、C 3个组切片的染色效果相当，D组在切片中感觉组织块软硬适中，切片厚薄均匀，连续性较好，细胞核与细胞质染色对比较鲜明、结构较清晰。

    2.2 IHC染色结果  A、B、C、D 4个组免疫组化染色结果未见明显差异，标本组织的细胞抗原性保存好，阳性结果定位准确，背景清晰，也未发现ER和PR有着色弱的现象。

    2.3 FISH检测结果  2例乳腺癌C-erb-B2+++阳性的标本做FISH检测，结果均见有呈簇状分布的红色信号，检测结果显示细胞核结构比较完整，红色和绿色荧光信号较好，对比清晰。

3讨论

甲醛具有较强烈的刺激性和腐蚀性，为致癌物质，可造成空气和环境污染而防护又极为困难。甲醛废液需特殊处理，不能直接排入管道。用甲醛处理标本，可引起组织内广泛的蛋白质交联，因而免疫组化染色时需进行抗原修复。甲醛存放过久易产生白色沉淀即三聚甲醛，而影响组织标本固定效果。甲醛不能固定肝糖原和尿酸，易氧化变成甲酸导致标本酸化，影响细胞核的染色效果。使用甲醛固定的陈旧组织也可形成甲醛色素，使病理诊断受到严重影响。

GS试剂不含甲醛、二甲苯等有毒有害物质，运用界面化学及电荷占位原理，对组织标本进行脱水、透明和浸蜡。GS试剂有较强的固定、脱水、脱脂兼硬化作用，不易导致组织过度收缩，无细胞空泡与核固缩现象产生，处理的组织软硬适中，尤其对脂肪、淋巴组织等组织的处理效果较好，处理较坚韧的子宫肌瘤、皮肤组织也能使其具有较好的柔韧度而有利于切片。GS试剂对组织渗透性强，能缩短脱水时间，能保持良好的组织形态学结构，同时能保护细胞膜的完整性，能******限度地保护组织中的抗原和核酸不被破坏、降解或扩散，对DNA和RNA保存较佳，也有利于显示细胞的亚结构。GS固定液回收简便易行，不需甲醛中和剂进行处理废液，可依据乙醇废液处理管理条例处置废液^[1]。   

经过对中性甲醛固定、传统方法脱水透明、GS无醛固定液固定、GS系列脱水透明套液脱水透明等几种方法处理组织制片后的HE染色、IHC染色和FISH检测综合比较分析，我们体会到用GS无醛固定液固定、GS系列脱水透明套液试剂制作的D组切片所做的HE染色和全自动免疫组化染色和FISH检测均能取得满意的结果，能完全满足临床病理诊断的需要，可以替代甲醛和二甲苯毒害试剂的使用，降低室内有毒有害气体的污染和毒害，从而杜绝排放此类毒化物对生活环境的污染，值得在病理自动化染色中推广应用。

 

参考文献：

[1] 田玉旺,朱红艳,李琳,等.GS环保试剂在病理制片中技术工作中的应用.2011年全国病技术新进展研讨会论文汇编,2011:25-28
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添加时间：2016-04-13 点击量：1205