GS环保组织套液制备病理石蜡切片在免疫组化染色中的应用

GS环保组织套液制备病理石蜡切片

在免疫组化染色中的应用

                                                                 肖莎  余力  卢贤  罗陆侨

                                                                 南方医科大学珠江医院病理科

摘自：2011年全国病理技术新进展研讨会论文汇编

免疫组化染色及诊断技术的应用日益广泛，并己成为常规病理诊断中不可缺少的重要方法及手段，良好的组织前期处理是做好免疫组化染色的前提和基础。在传统的组织制备过程中，甲醛和二甲苯作为常规试剂被大量使用，而这些试剂对于人体危害极大，长期使用可使白细胞降低，它的气味可使人产生头晕、恶心等不适感；而哈尔滨格林标本技术开发有限公司推出的GS组织样本制备套液是一种无醛无苯环保组织标本处理液。我们使用GS组织套 液对临床病理组织样本处理制备石蜡切片，进行免疫组化染色，并与传统组织处理石蜡切片免疫组化染色进行比较，现报告如下。

1.材料与方法

 1.1取临床送检乳腺癌、结肠癌、肺癌、卵巢癌、淋巴瘤各2块。

取1块放入10%中性甲醛固定，经传统乙醇、二甲苯脱水、透明浸蜡包埋，做石蜡切片；

取另1块放入格林GS无甲醛固定，使用格林GS组织样本制备套液脱水液、透明液、浸蜡液处理，包埋，做石蜡切片；

GS组织样本制备程序:

 

序号	1	2	3	4	5	6	7	8	9
步骤	固定液	固定液	脱水液I	脱水液I	脱水液H	脱水液II	透明液	浸蜡液I	浸蜡液H
产品 编号	GSA-01 GSB-01	GSA-01 GSB-01	GSA-02 GSB-02	GSA-02 GSB-02	GSA-03 GSB-03	GSA-03 GSB-03	GSA-04 GSB-04	GSA-05	GSA-06

 1.2 免疫组化主要步骤

乳腺癌检测ER、PR、C-erb-B2;结肠癌检测CA-199、P53；肺癌检测EGFR；卵巢癌检测 CA-125；淋巴瘤检测 LCA、CD20、CD45RO。

一抗及MaxVision检测试剂盒均来自福州迈新生物技术有限公司。

染色步骤：

上述己脱水包埋的组织切片厚4-5nm，常规脱蜡至水，3%H202溶液室温下孵育lOmin， PBS冲洗；抗原修复：根据一抗推荐要求分别使用ph6.0柠檬酸缓冲液、PH8.0 EDTA缓冲液及胰酶消化液进行抗原修复，PBS冲洗。一抗室温下lh，其余按试剂盒说明书进行，DAB 显色5-8min，苏木素复染、分化、蓝化、脱水、透明、中性树胶封片，光镜观察。

3. 结果

采用格林GS环保型组织样本套液制作的组织石蜡切片及采用传统组织处理制作的石蜡切片，经免疫组化染色显示，细胞内抗原成分保存良好，阳性结果定位准确，背景清晰。两组组织样本处理制备石蜡切片免疫组化染色结果相比无明显差异。

4. 讨论

免疫组织化学染色技术目前己经成为肿瘤病理诊断和鉴别诊断不可缺少的重要工具。一张成功的免疫染色切片与良好组织样本的前期处理密切相关，组织固定、脱水的效果，不仅影响病理切片制作的质量，更直接影响着免疫染色的结果。随着现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究，基因检测等技术也对组织前期处理质量的要求越来越高。甲醛作为一种传统的组织固定剂已被沿用了一个多世纪，它对组织渗透能力强，固定均匀，收缩小，能较好地保存组织结果，能相对较好地保存抗原的活性；加之其配制简单，价格低廉，所以至今仍被广泛应用。但众所周知甲醛具有强烈的毒性：具有强烈的刺激性和腐蚀性，严重影响空气和环境的质量；长期接触会对人体造成许多危害。同时组织样本在经甲醛固定后可引起组织内蛋白质广泛交联，再进行免疫组化染色时需进行抗原修复。因此，随着对实验环境安全更高的要求，以及寻找能够更好保存组织抗原活性、对组织无交联作用的固定液，就成为病理届同仁们翘首企盼的愿望。本文作者使用的格林GS组织样本制备套液中的固定液便是环保型无醛复合固定液，该液体无味、无刺激性：其穿透速度与甲醛大致相同，能有效地保存作者内抗原活性，免疫组化染色效果良好，完全可以取代甲醛对组织样本的固定， 且绿色环保，可以说是固定技术革命性的突破。

传统组织样本石蜡切片制备过程中，二甲苯被大量使用，二甲苯属芳香族化合物，对人体具有较强的毒害作用，且废弃的二甲苯对空气、环境也会造成污染；而格林GS环保套液的透明液为非苯******型复合试剂，可替代二甲苯对组织脱水后的透明处理，该透明液对组织渗透力强、处理温和，同时组织样本较长时间浸泡在其中也不会出现明显的收缩和硬化，对后期的切片及各种染色起到了良好的质量保障作用。

我科室使用格林GS环保组织样本制备套液，完全替代了甲醛及苯类试剂，建成了“绿色实验室”，科室的同事们在安全的环境里工作学校，身心健康都得到了保证。经实际应用，环保型GS组织套液完全适用于病理诊断所需的常规HE染色及免疫组化染色，值得广大病理工作者推广使用。

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添加时间：2016-04-12 点击量：1554