GS环保试剂在HPVLI壳蛋白检测技术中的应用

河南省人民医院病理科

        摘自：2014年《临床与试验病理学杂志》

        原位杂交技术的广泛应用为各学科的研究带来突破性进展，其对组织标本的常规处理要求越来越高。在日常病理组织处理过程中，甲醛和二甲苯作为病理常规试剂被大量应用。但是传统试剂具有强烈的刺激性和一定的毒性，不利于环保和工作人员的健康。作者尝试应用环保型GS (green specimen)组织样本制备套液制作组织蜡块，并应用原位杂交技术检测HPV L1壳蛋白的表达，以探讨GS环保试剂对HPV L1壳蛋白检测的影响。

1. 材料与方法

 1.1 材料

选取2012年1月-2013年5月河南省人民医院病理科存档的子宫颈活检标本236例。经病毒学检测均确诊为HPV感染。（1)主要仪器设备:组织处理采用德国莱卡公司生产的LEICA ASP300S全自动脱水机；组织包埋采用LEICA EG1150H包埋机；组织切片采用LEICA RM2235 切片机。（2)试剂:GS组织样本制备套液（GS组织标本固定液、GS组织标本脱水液、GS组织标本透明液、GS组织标本 浸蜡液）（哈尔滨格林公司）。传统病理脱水试剂包括10% 中******尔马林、二甲苯、乙醇、58-60 T：石蜡（郑州派尼化学 试剂厂提供）。（3)人乳头瘤病毒壳蛋白（HPV L1)染色：采 用CytoReact赛泰细胞/组织人乳头瘤病毒染色试剂盒。

 1.2 方法

将选取标本随机平分为A、B两组，A组采用GS 环保试剂脱水包埋。将取完材的标本放入LEICA ASP300S 全自动脱水机经GS组织制备套液进行处理。具体程序步骤及时间如下：（1) GS组织标本固定液I (1缸）固定1 h， GS组织标本固定液I (2缸）固定3 h；(2) GS组织标本脱水 液I (1缸）脱水40 min， GS组织标本脱水液I (2缸）脱水1 h， GS组织标本脱水液n (1缸）脱水40 min， GS组织标本脱 水液H (2缸）脱水1 h；(3) GS组织标本透明液I (1缸）透明1 h， GS组织标本透明液I (2缸）透明1.5 h；⑷GS组织收稿日期:2013 -12-18标本浸蜡液I、H、n浸透各1 h。之后LEICA EG1150H包埋机石蜡包埋，用LEICA RM2235切片机常规3 pm厚切片。B组采用传统病理脱水剂脱水包埋，步骤同上。

依据文献报道1及作者观察发现GS环保试剂与传统试剂在HE形态学对比方面无影响，遂筛选出2组子宫颈上皮内瘤变CIN2组织切片进行HE染色。将两组CIN2病例蜡块再次3 pm厚切片，进行HPVL1壳蛋白原位杂交检测。具体步骤详见CytoReact赛泰细胞/组织人乳头瘤病毒染色试剂盒使用说明书。注意在整个操作过程中应避免玻片干燥。

每个试剂盒设立平行阳/阴性对照片。作为对照的阳、阴性石蜡切片，制作染色步骤同上。

2. 结果

两组CIN2标本病例数如下：A组75例，B组58例。 HPV L1壳蛋白为壳蛋白质，阳性部位在细胞核，胞核呈红色为特异性阳性染色，其它部位的红染均为非特异性染色。镜下见明确被红染的细胞核即可诊断为HPVL1阳性。采用环保型GS组织样本制备套液制作的标本能检测组织中相应抗原，定位准确，背景清晰；经GS环保试剂处理的标本染色效果与传统方法相同（图1、2)。两组标本中HPVL1阳性率，差异无统计学意义（P =0.81，表1)。

表1两组CIN2病例HPVL1壳蛋白阳性表达的差异

组别			HPVL1
		+	阳性率（％)
A组	75	13	17. 3
B组	58	11	19.0
合计	133	24	36. 3

图1传统脱水剂:HPV Ll壳蛋白原位杂交检测效果

  图2环保试剂脱水:HPV Ll壳蛋白原位杂交检测效果

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添加时间：2016-04-07 点击量：1325