GS环保固定与传统固定染色在冷冻切片中应用

GS环保固定与传统固定染色在冷冻切片中应用

林红

沈阳市******人民医院病理科

摘自：2014年20期《临床研究》

医生可利用冷冻切片进行准确诊断，而固定与染色是决定冷冻切片是否能达到高水准的关键，所以应重视固定液与染液的选择和应用。目前常见的固定液类目广泛，但都达不到环保标准，且部分固定液，固定耗时长，显示效果差，对比度差，且易造成细胞肿胀、变形、空泡，易导致漏诊、误诊、延误******。同时95°%乙醇长时间固定无法保证组织细胞的形态，将固定时间缩短后，使用GS染色套液染色能够避免以上缺点，制片效果良好。传统固定液HE套液虽具有较好的临床效果，但其包含的二甲苯会导致人体神经系统、造血系统受损，且汞成分的使用也达不到环保排放的要求。故本研究主要采用GS固定染色套液对病理切片进行冰冻切片处理，并与传统固定染色套液进行比较，现报道如下。

1. 资料与方法

 1.1 —般资料

随机选取2013年6〜12月我院手术标本300例，其中有甲状腺、肝、肾、子宫、输卵管、脑、卵巢以及肠道等，随机选择其中150例进行GS固定染色套液固定（哈尔滨格林标本技术开发有限公司研制并生产），另150例则使用传统固定液（主要成分为 二甲苯）进行固定。

 1.2 GS固定染色套液制片法及使用制剂

通过无醛型固定液对组织标本进行浸泡，并分别于固定后1、3、6、12、24h提取组织标本进行处理， 使用的设备为SHANDON全自动病理组织固定切片机，依次使用组织固定剂、医用酒精、无水酒精、组织脱水剂、组织透明剂、浸蜡处理以及石蜡包埋等过程。对病理标本进行切片、HE染色、免疫组化染色和荧光原位杂交检测等。

 1.3 研究方法及观察指标

所有标本进行编号，并按照数字随机法分为两组，比较两组使用上出现刺激性气味、固定效果不佳及染色效果不佳的比例，并对骨组织脱钙和肺癌TIF-1+固定效果进行比较。

 1.4 统计学处理

应用SPSS13.0进行，计量资料以反±5)表示， 两组间均数的比较使用（检验，组间率的比较采用 x2检验，户 < 0.05为差异有统计学意义。

3. 讨论

对手术标本进行组织处理时，组织固定会直接影响染色的效果。传统的固定组织以甲醛为主。 它能有效穿透组织，较好的保持了组织原有形态， 且使用成本低，所以至今仍被广泛应用。

甲醛的主要缺点：（1)挥发性强，刺激性和腐蚀性很强，环境 危害严重，且难以防护。研究表明，甲醛接触皮肤会引发皮肤过敏等症状。长期使用甲醛还会诱发慢性呼吸道疾病、癌症发生，白细胞数量减少，记忆力和智力下降。（2)长时间存放的甲醛会部分转化为 三聚甲醛，导致固定组织标本效果不佳；。(3)甲醛易氧化成甲酸，在进行固定染色时会使标本酸化，导致染色效果不佳；在对陈旧组织固定时，易在组织内形成甲醛色素，从而影响病理诊断。（4)无法固定肝糖原和尿酸。（5)废液需要进行出来才能排放，处理成本较高。（6)醛类固定液在处理标本时会引发组织内蛋白质交联，不利于DNA的保存。 随着对实验室环境安全要求的提高，研发没有毒性的甲醛替代品已经迫在眉睫。目前国外已经在这方面有相关研究报道，但国内仍处于落后状态。

本文选择了国产GS固定液。GS组织标本固定脱水试剂不但能够有效软化组织，且穿透性高。在固定组织的同时还能进行脱水和脱脂。酸性溶液能够较好的保存DNA。与常规制片效果相似，符合某些肿瘤分子生物学研究要求。因此其能较好应用于组织标本，******无害，符合环保要求。

本研究常规固定法使用的二甲苯被用于传统组织处理和染色中，它挥发性强，对人体危害极大。会严重刺激************和植物神经，长时间接触会引发头昏目眩、肢体颤抖、免疫功能减退等，并有致癌效果。 二甲苯还会对环境造成严重的污染，如大量废弃二甲苯进入下水道会导致城市水污染。为克服二甲苯的缺陷，有学者尝试使用替代品：如脱色汽油、硬脂酸、异丙醇、松节油等，但***终效果仍然不理想。本组选择的GS环保型固定染色套液，这些试剂都是无非苯******型，完全避免了二甲苯造成的人体伤害及环境污染。GS脱蜡剂，脱蜡完全，时间少。GS透明剂穿透组织能力强，处理组织触感好，即使是长时间浸泡组织标本也不会引发收缩和硬化现象，不会脆化组织。本研究如图1〜4所示，图2及图4相对于图1和图3， 其示片更为清晰，且所耗时间短，临床诊断更明确。

GS脱水液能做到怡当脱水，不会出现脱水不足或过度的问题，可同时处理多个大小组织。GS环保套液无醛、无苯、不易挥发，生物降解难度低，不会造成环境污染。其主要特点：（1)能轻易透过组织，节省脱水时间；（2)不会破坏组织形态学结构，保持细胞膜完好；（3)在固定、脱水、脱脂和硬化方面表现良好，不会造成组织收缩过度、细胞空泡消失与核固缩小等问题； (4)保持了大体标本的触感，有助于有针对性的分离并切取组织块，避免脂肪组织标本出现粘滑感及粘稠性，能够快速有效清洁；(5)避免了组织抗原与蛋白质DNA的 破坏；（6) DNA和RNA保存完整，利于细胞显示和生物学研究；(7)废液回收处理方便；（8)染色步骤简化，节省时间。相比传统方法制片，GS套液环保效果令人满意，适用于临床病理诊断，避免了甲醛和二甲苯产生的负面影响，达到了实验室环保标准，在病理技术工作中推广应用的价值巨大。

 

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添加时间：2016-04-07 点击量：1272