GS环保固定与传统固定染色在冷冻切片中应用
GS环保固定与传统固定染色在冷冻切片中应用
林红
沈阳市******人民医院病理科
摘自:2014年20期《临床研究》
医生可利用冷冻切片进行准确诊断,而固定与染色是决定冷冻切片是否能达到高水准的关键,所以应重视固定液与染液的选择和应用。目前常见的固定液类目广泛,但都达不到环保标准,且部分固定液,固定耗时长,显示效果差,对比度差,且易造成细胞肿胀、变形、空泡,易导致漏诊、误诊、延误******。同时95°%乙醇长时间固定无法保证组织细胞的形态,将固定时间缩短后,使用GS染色套液染色能够避免以上缺点,制片效果良好。传统固定液HE套液虽具有较好的临床效果,但其包含的二甲苯会导致人体神经系统、造血系统受损,且汞成分的使用也达不到环保排放的要求。故本研究主要采用GS固定染色套液对病理切片进行冰冻切片处理,并与传统固定染色套液进行比较,现报道如下。
1. 资料与方法
1.1 —般资料
随机选取2013年6〜12月我院手术标本300例,其中有甲状腺、肝、肾、子宫、输卵管、脑、卵巢以及肠道等,随机选择其中150例进行GS固定染色套液固定(哈尔滨格林标本技术开发有限公司研制并生产),另150例则使用传统固定液(主要成分为 二甲苯)进行固定。
1.2 GS固定染色套液制片法及使用制剂
通过无醛型固定液对组织标本进行浸泡,并分别于固定后1、3、6、12、24h提取组织标本进行处理, 使用的设备为SHANDON全自动病理组织固定切片机,依次使用组织固定剂、医用酒精、无水酒精、组织脱水剂、组织透明剂、浸蜡处理以及石蜡包埋等过程。对病理标本进行切片、HE染色、免疫组化染色和荧光原位杂交检测等。
1.3 研究方法及观察指标
所有标本进行编号,并按照数字随机法分为两组,比较两组使用上出现刺激性气味、固定效果不佳及染色效果不佳的比例,并对骨组织脱钙和肺癌TIF-1+固定效果进行比较。
1.4 统计学处理
应用SPSS13.0进行,计量资料以反±5)表示, 两组间均数的比较使用(检验,组间率的比较采用 x2检验,户 < 0.05为差异有统计学意义。
3. 讨论
对手术标本进行组织处理时,组织固定会直接影响染色的效果。传统的固定组织以甲醛为主。 它能有效穿透组织,较好的保持了组织原有形态, 且使用成本低,所以至今仍被广泛应用。
甲醛的主要缺点:(1)挥发性强,刺激性和腐蚀性很强,环境 危害严重,且难以防护。研究表明,甲醛接触皮肤会引发皮肤过敏等症状。长期使用甲醛还会诱发慢性呼吸道疾病、癌症发生,白细胞数量减少,记忆力和智力下降。(2)长时间存放的甲醛会部分转化为 三聚甲醛,导致固定组织标本效果不佳;。(3)甲醛易氧化成甲酸,在进行固定染色时会使标本酸化,导致染色效果不佳;在对陈旧组织固定时,易在组织内形成甲醛色素,从而影响病理诊断。(4)无法固定肝糖原和尿酸。(5)废液需要进行出来才能排放,处理成本较高。(6)醛类固定液在处理标本时会引发组织内蛋白质交联,不利于DNA的保存。 随着对实验室环境安全要求的提高,研发没有毒性的甲醛替代品已经迫在眉睫。目前国外已经在这方面有相关研究报道,但国内仍处于落后状态。
本文选择了国产GS固定液。GS组织标本固定脱水试剂不但能够有效软化组织,且穿透性高。在固定组织的同时还能进行脱水和脱脂。酸性溶液能够较好的保存DNA。与常规制片效果相似,符合某些肿瘤分子生物学研究要求。因此其能较好应用于组织标本,******无害,符合环保要求。
本研究常规固定法使用的二甲苯被用于传统组织处理和染色中,它挥发性强,对人体危害极大。会严重刺激************和植物神经,长时间接触会引发头昏目眩、肢体颤抖、免疫功能减退等,并有致癌效果。 二甲苯还会对环境造成严重的污染,如大量废弃二甲苯进入下水道会导致城市水污染。为克服二甲苯的缺陷,有学者尝试使用替代品:如脱色汽油、硬脂酸、异丙醇、松节油等,但***终效果仍然不理想。本组选择的GS环保型固定染色套液,这些试剂都是无非苯******型,完全避免了二甲苯造成的人体伤害及环境污染。GS脱蜡剂,脱蜡完全,时间少。GS透明剂穿透组织能力强,处理组织触感好,即使是长时间浸泡组织标本也不会引发收缩和硬化现象,不会脆化组织。本研究如图1〜4所示,图2及图4相对于图1和图3, 其示片更为清晰,且所耗时间短,临床诊断更明确。
GS脱水液能做到怡当脱水,不会出现脱水不足或过度的问题,可同时处理多个大小组织。GS环保套液无醛、无苯、不易挥发,生物降解难度低,不会造成环境污染。其主要特点:(1)能轻易透过组织,节省脱水时间;(2)不会破坏组织形态学结构,保持细胞膜完好;(3)在固定、脱水、脱脂和硬化方面表现良好,不会造成组织收缩过度、细胞空泡消失与核固缩小等问题; (4)保持了大体标本的触感,有助于有针对性的分离并切取组织块,避免脂肪组织标本出现粘滑感及粘稠性,能够快速有效清洁;(5)避免了组织抗原与蛋白质DNA的 破坏;(6) DNA和RNA保存完整,利于细胞显示和生物学研究;(7)废液回收处理方便;(8)染色步骤简化,节省时间。相比传统方法制片,GS套液环保效果令人满意,适用于临床病理诊断,避免了甲醛和二甲苯产生的负面影响,达到了实验室环保标准,在病理技术工作中推广应用的价值巨大。
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