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GS环保试剂在骨髓病理石蜡包埋制片技术中的应用

王华  缪勇建

广西医科大学******附属医院病理科

骨髓穿刺组织石蜡包埋制片技术在病理技术工作中是重点,也是难点。组织固定、脱钙、脱水是***基本***重要的一个步骤。多年以来,病理科一直使用乙醇二甲苯作为常规组织脱水剂、透明剂;二甲苯是一种具有强烈刺激性的挥发性液体,不仅污染环境,更危害人体健康;对环保与人体健康的关注,需要一种对人体无害安全并且能保持组织处理质量的环保替代品,作为病理技术工作中理想的脱水透明剂。本文就GS环保试剂对骨髓组织脱水透明常规HE染色制片、免疫组化检测及原位杂交检测效果进行评价。

 1. 材料和方法

  1.1 材料

选择广西医科大学******附属医院病理科骨髓穿刺活检标本15例。其中大致正常骨髓2例,增生性骨髓4例,骨髓瘤4例,骨髓发育异常综合症(MDS)4例,NK/T细胞淋巴瘤骨髓累及1例。

  1.2主要仪器

Shandon Pathcentre全自动脱水机,Shandon Finesse切片机,樱花全自动HE染色机,美国ThermoBrite Abbott公司原位杂交仪。

  1.3试剂

GS环保固定脱水试剂(由哈尔滨格林标本技术开发有限公司研制并生产),免疫组化试剂(一抗北京中杉金桥生物技术有限公司,二抗上海长岛生物技术有限公司),EBER原位杂交试剂盒(PanPath公司)。

 2. 方法

  2.1固定与脱钙

40例骨髓穿刺标本均进行4%中性缓冲甲醛******次固定24小时,10%硝酸甲醛脱钙液脱钙30分钟。

  2.2组织脱水

采用GS环保固定脱水试剂处理 ,步骤如下: = 1 \* GB3 GSA01(2hGSA011h = 2 \* GB3 70%乙醇40min80%乙醇40min = 3 \* GB3 GSA02(1h GSA0240min = 4 \* GB3 GSA03(1hGSA0340min⑤GSA041hGSA0440min⑥GSA0540minGSA0550min⑦GSA061hGSA061h,石蜡包埋,切片,厚1.5微米。

  2.3 HE染色

日本樱花公司全自动HE染色推荐程序染色。

  2.4免疫组化染色 

采用SupervisionTM鼠兔通用二步法进行免疫组化染色,增生性骨髓检测CD3,CD20,CD43,CD61,CD68,MPO,KI-67;骨髓瘤检测CD38,CD138,KI-67,CD20,CD79a;骨髓发育异常综合症检测CD3,CD20,MPO,CD138,CD117,F8;NK/T细胞淋巴瘤骨髓累及检测CD2,CD3,CD5,CD7,CD4,CD8,GrB,CD56;具体染色步骤同常规。

  2.5 ISH检测

NK/T细胞淋巴瘤骨髓累及应用PanPath公司EBER原位杂交试剂盒,参照试剂盒说明书推荐的步骤操作。

 3. 结果

使用GS环保固定脱水试剂处理的20例标本,在切片中感觉组织块软硬适中,切片厚薄均匀,薄切时连续性好,切片平整。GS环保固定脱水试剂处理的骨髓组织中各系骨髓细胞常规HE染色效果好,细胞形态完整,着色好,细胞收缩不明显,核浆对比清晰,粒系细胞胞浆中嗜酸、嗜碱、嗜中性颗粒清晰可见 (图A、B、C)。各项免疫组化染色,细胞抗原性保存好,阳性结果定位准确,背景清晰(图D、E、F、G)。一例NK/T细胞淋巴瘤骨髓累及进行EBER原位杂交检测,阳性结果准确定位在肿瘤细胞核,阳性信号清晰,背景干净(图H )。

 4.讨论

骨髓病理是临床病理诊断中的重要的一个部分,也是一个难点。造成骨髓组织诊断困难有几个原因:(1)正常骨髓细胞成分复杂,各系细胞处于不同的发育阶段形态特点多样;(2)淋巴造血系统疾病复杂多变,骨髓穿刺的组织少,增加了病理诊断的难度;(3)骨髓组织必须经过脱钙处理后才能进行脱水石蜡包埋制片,脱钙处理对保持骨髓的组织细胞结构造成一定的影响。

传统使用10%中******尔马林作为固定液、乙醇二甲苯作为脱水透明剂,对组织渗透能力强,固定均匀,因此过去很长时间作为病理科常规固定脱水剂;但在实践中发现,使用乙醇二甲苯作为脱水透明剂处理骨髓穿刺组织,骨髓组织硬化明显,骨髓细胞收缩较大,导致切片厚薄不均,切片不平滑,难以切薄片等现象。骨髓病理石蜡制片的好坏不但与组织固定存在着密切的关系,也与组织的脱水透明有重要的关系。固定脱水透明的效果不但直接影响骨髓病理石蜡切片HE染色的质量,更有可能免疫组化与原位杂交检测的结果。随着分子病理学的不断发展,基因检测等新技术的应用也对固定组织的质量要求越来越高,因此,选择一种安全有效的固定脱水透明试剂处理组织以达到******状态,对骨髓病理诊断非常关键。

病理实验室将二甲苯作为透明剂使用,它极易挥发,是一种对人体具有较强毒害作用的有机化学试剂。其毒性主要是刺激皮肤和眼睛。靶器官为胎儿、呼吸系统以及神经中枢系统。反复接触,产生神经毒性效应(记忆力下降、协调不良、情绪波动和******性神经损伤)。普通的手套材料不能提供充分的保护[1,2]。采用GS环保型试剂对骨髓穿刺组织进行固定脱水透明,对组织渗透力强,透明剂较温和,处理组织软硬适中,不易使组织变硬变脆,骨髓组织出现收缩和硬化现象明显减轻,取得了理想的制片效果。


参考文献

[1] John D, Bancroft, Marilyn Gamble .组织学技术的理论与实践[M].周小鸽、刘勇主译,北京:北京大学医学出版社,201025-26.

[2] 高蓉梅,彭凤翔,李永春.TO型生物制片透明剂取代二甲苯在病理制片中的应用[J].诊断病理学杂志,2009122:147.






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添加时间:2016-04-01 点击量:1286

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