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病理论坛在线咨询GS无醛固定液在病理技术工作中的应用
GS无醛固定液在病理技术工作中的应用
谢永强 郭蕾 刘秀云 郑闪 沈贵华
中国医学科学院肿瘤医院病理科
摘自：2011年02期《诊断病理学杂志》
组织固定是病理技术工作的关键步骤，直接决定常规染色效果及分子病理检测项目的实验结果。多年以来，病理科一直使用10%中******尔马林作为常规组织固定液。然而，福尔马林是一种具有强烈刺激性的挥发性液体，不仅污染环境，而且危害人体健康。无醛固定液是一种新型的组织固定液，因其不含福尔马林，对人体无伤害，环境无污染，应能成为病理技术工作中理想的固定液。本文就一种新型的无醛固定液对不同组织的固定效果进行如下评价，以验证其取代福尔马林的可行性。
1. 材料与方法
1.1 材料
随机选择中国医学科学院肿瘤医院手术室送检的新鲜标本4例，包括乳腺癌2例，结肠癌1例，淋巴瘤1例。
1.2 仪器和试剂
脱水机（Leica ASP 300型），切片机（Leica2235），Leica染-封一体机，Roche全自动免疫组化染色仪（VENTANA），原位杂交仪（美国ThermoBrite Abbott公司），荧光显微镜（OLYMPUS BX51）。无醛固定液（由哈尔滨格林标本技术开发有限公司研制并生产）。ER、PR及HER2(Roche公司)， CK18、CDX2、LCA、CD20、CD79a及Bcl-2为工作液（迈新公司），HER2探针Vysis原位杂交试剂盒（DAKO公司）。
1.3 固定
分别择取肿瘤及瘤旁正常组织，切成2.0cm×1.0cm×0.2cm大小的组织块，装入包埋盒中，放入无醛固定液中固定12h，常规脱水、包埋、切片[1]。全自动染色机进行HE染色。
1.4 免疫组化染色
标本经无醛固定液固定后，石蜡包埋，3m连续切片。以全自动免疫组化染色仪行相应标本的免疫组织化学染色。
1.5 FISH检测
2例乳腺癌病例应用Vysis HER2检测试剂盒，参照试剂盒说明书推荐的步骤操作。
2. 结果
使用无醛固定液固定4例标本，在切片中感觉组织块软硬适中，切片厚薄均匀，连续性好。常规HE染色效果良好，细胞形态完整，核浆对比清晰(图1，2)。
乳腺癌病例行ER，PR，HER2免疫组化染色，结肠癌病例行CK18，CDX2，LCA免疫组化染色，淋巴瘤病例行CD20，CD79a，Bcl-2免疫组化染色。染色结果显示无醛固定液固定的标本组织细胞抗原性保存好，阳性结果定位准确，背景清晰(图3，4)。
乳腺浸润性导管癌病例均行FISH检测HER2基因扩增状态，检测结果显示细胞核结构比较完整，红色和绿色荧光信号较好，对比清晰(图5)。
3. 讨论
组织固定是病理技术的基础。组织固定的效果，不仅直接影响病理切片制作的质量，还影响着免疫组化和分子病理的检测结果。传统的10%中******尔马林固定液，对组织渗透能力强，固定均匀，组织收缩小，因此是现在病理科常规固定液。但其也有着明显的缺点，包括①有刺激性气味，个别人接触可导致皮肤过敏；②存放过久可聚合成三聚甲醛，影响固定效果；③易形成甲醛色素，与含铁血黄素相混淆；④不能固定肝糖原和尿酸；⑤长时间固定影响染色效果[2]。但其******的缺点是对人体有着极强的危害性，病理科工作人员长期吸入能引起慢性中毒，同时它也是一种致癌物质。因福尔马林有如此明显的缺点，长期以来用无醛固定液取代福尔马林进行组织固定是病理科技术革新的内容之一。
无醛固定液是一种环保固定液，它******、无色、无异味、无刺激性，PH值中性，且与甲醛固定组织的时间相同，可以应用于固定的组织标本。我们的研究结果显示无醛固定液与常规的10%中******尔马林固定液在HE染色、免疫组化染色、荧光原位杂交等病理科日常工作中均有相似的效果，可以取代后者成为病理科常规固定液。
参考文献
[1] 周庚寅．组织病理学技术[M]．北京:北京大学医学出版社，2000，1-2.
[2] 周会芹，杨江辉，余琦等．不同组织固定液对免疫组化结果的影响. 诊断病理学杂志，2009，6（16）：478.
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